Дмитрий Хрусталёв родился 20 февраля 1979 года в Ленинграде. С детства занимался бальными танцами. После окончания школы поступил в Санкт-Петербургский государственный аграрный университет в городе Пушкин. В университете увлёкся игрой КВН. Перевёлся на экономический факультет Государственного университета аэрокосмического приборостроения и окончил его по специальности «менеджер науки и образования».

С 1998 года выступал за команду КВН «Сборная Санкт-Петербурга», был её капитаном. В составе команды стал обладателем Кубка Москвы 1998 года, финалистом Высшей Лиги 1999 года, обладателем «Малого КиВиНа» на фестивале Голосящий КиВиН 2000 года и вице-чемпионом Высшей Лиги 2002 года. В 2003 году в составе команды «Сборная СССР» завоевал Летний кубок КВН. Получил известность благодаря своим пародиям на Владимира Путина.

После КВНа Дмитрий Хрусталёв на несколько лет пропал с телеэкранов. В 2007 года он стал резидентом программы «Comedy Club» в дуэте с Виктором Васильевым. С 2008 снимался в программе «Comedy Woman. В 2013 году стал соведущим Ивана Урганта в программе «Вечерний Ургант» на «Первом канале». В апреле 2014 года стал ведущим нового шоу «Ленинградский Stand-up клуб» на канале «СТС».

С 2001 года состоял в гражданском браке с Викторией Дейчук, юристом по профессии. Спустя 10 лет они расстались. В 2013 году у Дмитрия Хрусталёва был роман с соучастницей передачи «Comedy Woman» Екатериной Варнавой. В конце 2013 года стало известно, что пара рассталась